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Curso teórico-práctico: Diagnóstico de enfermedades de moluscos bivalvos

 

PATOLOGÍA: NOCIONES BÁSICAS

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  • Por enfermedad se entiende cualquier desviación negativa del estado normal (salud) de un organismo (Kinne, 1980). Se trata de un concepto relativo y dinámico y que representa la pérdida del equilibrio o homeostasis de un organismo.

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  • Son numerosas las causas de una enfermedad (ambientales, nutricionales, infecciosas, genéticas etc.) y no suelen presentarse de forma individual sino conjunta y actuando en sinergia

  • Las enfermedades infecciosas son por su capacidad de dispersión y efectos económicos las que reclaman un mayor interés en la acuicultura marina actual

  • No confundir infección con enfermedad.

  • Los agentes infecciosos forman parte de la biocenosis y juegan un papel esencial en el equilibrio entre poblaciones

  • Las principales enfermedad descritas lo han sido en condiciones de cultivo.

PECULIARIDADES DE LA PATOLOGÍA EN ACUICULTURA

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  • El medio acuático facilita la dispersión de contaminantes y agentes infecciosos y dificulta el aislamiento de los sistemas de cultivo. La acuicultura es quizá la actividad productiva más sensible a la contaminación ambiental .

  • La alimentación natural (completa en moluscos y en las primeras fases en crustáceos y peces) dificulta el control microbiológico del cultivo.

  • La alta densidad de cultivo, en particular en las fases larvarias y postlarvarias, facilita la rápida propagación de las infecciones.

  • La conexión del cultivo con el medio natural y las poblaciones salvajes (en especial en los moluscos) dificulta los programas clásicos de erradicación y exige otras técnicas de prevención y lucha contra las enfermedades.

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PRINCIPALES ENFERMEDADES CAUSADAS POR VIRUS

PECULIARIDADES
PORVIRUS
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IRIDOVIRUS

 

  • Enfermedad vírica del velo de la ostra (OVVD): C. gigas

  • Enfermedad de las branquias: C. angulata y C. gigas

  • Virosis hemocitaria: C. gigas y C. angulata

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HERPESVIRUS

 

Herpesvirus en larvas postlarvas y semillas de C. gigas OsHV1- µvar

DELPHYLUMMICROSPORA
PORHONGOS
PORBACTERIAS

PRINCIPALES ENFERMEDADES CAUSADAS POR PROTOZOOS

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  • SARCOMASTIGOPHORA (generalmente saprófitos) 

  • FLAGELADOS (Hexamita nelsoni en ostreidos)​​

  • RIZÓPODOS (amebas, Hartmannella, Acanthamoeba sp. en ostreidos) 

  • LABYRINTHOMORPHA Labyrinthula y Labyrinthomyxa spp. Quahog Parasite Unknown (QPX) (LABYRINTHULOMYCOTA)​​

  • CILIOPHORA (CILIADOS): numerosas especies, p.e:

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PORPROTOZOOS

PRINCIPALES ENFERMEDADES CAUSADAS POR BACTERIAS

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  • Infecciones por rickettsias, chlamydias y micoplasmas

  • Bolas bacterianas

  • Bacteriemia inflamatoria de la ostra, necrosis bacilar

  • Vibriosis en larvas (necrosis bacilar)

  • Anillo marrón (Vibrio tapetis)

  • Necrosis muscular por vibriosis

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DELPHYLUMPARAMYXEA

PRINCIPALES ENFERMEDADES CAUSADAS POR HONGOS

  • Micosis larvaria: Sirolpidium zoophthorum

  •  Enfermedad del micelio

  •  Enfermedad de la concha = enfermedad del pie = enfermedad de la charnela= enfermedad de las pústulas amarillas: Ostracobable implexa

  •  Necrosis del músculo aductor asociada a infecciones por hongos

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PRINCIPALES ENFERMEDADES CAUSADAS POR PROTOZOOS DEL PHYLUM PARAMYXEA

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  • MARTEILIASIS (Marteilia spp.): parásito del epitelio del digestivo, en especial de la glándula digestiva. La especie más conocida por las mortalidades causadas en Francia en los 70 es M. refringens que afecta a Ostrea edulis, Mytilus edulis y M. galloprovincialis (excepcionalmente a otras especies). Otros géneros de interés son Paramarteilia. Marteiloides y Paramyxa

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DELPHYLUMHAPLOSPORIDIA

Porospora sp.

PRINCIPALES ENFERMEDADES CAUSADAS POR PROTOZOOS DEL PHYLUM APICOMPLEXA

 

COCCIDIOS Y GREGARINAS

Nematopsis sp.

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PRINCIPALES ENFERMEDADES CAUSADAS POR PROTOZOOS DEL PHYLUM MICROSPORA

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Los más conocidos parasitan los ovocitos de O. edulis (Steinhausia ovicola) y de M. galloprovincialis (S. mytilovum). Existen especies aún sin identificar: Microspora-like.

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Otras especies: Mikrocytos mackini, Bonamia exitiosa, Bonamia perspora, Bonamia roughleyi

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PRINCIPALES ENFERMEDADES CAUSADAS POR PROTOZOOS DEL PHYLUM HAPLOSPORIDIA

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  • HAPLOSPORIDIOSIS (Haplosporidium spp.): las más conocidas son MSX (H. nelsoni) SSO (H. costale) que afectan a C. virginica y C. gigas. H. armoricanum en O. edulis. Minchinia tapetis es el conocido en R. decussatus.

  • Bonamia ostreae: parásito de los hemocitos de Ostrea edulis y responsable de mortalidades en toda Europa desde 1980.

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DELPHYLUMAPICOMPLEXA
PhylumPerkinsozoa
NEOPLASIAS

PRINCIPALES ENFERMEDADES CAUSADAS POR PROTOZOOS DEL GÉNERO PERKINSUS (Phylum Perkinsozoa)

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  • Inicialmente se le describió como un hongo, posteriormente como un aplicomplexa y finalmente se propone un phylum nuevo próximo a los dinoflagelados

  • Actualmente se conocen 9 especies que afectan al menos a 65 especies de bivalvos y 5 de gasterópodos

  • Presente en todas las aguas cálidas del mundo

  • Afecta al conectivo de diferentes órganos -branquia, manto y palpos principalmente- provocando una intensa reacción hemocitaria.

  • De especial interés son P. marinus que afecta a C. virginica y es responsable de mortalidades históricas en EEUU y P. olseni que afecta a R. decussatus, R philippinarum, V. pullastra y V. aurea de nuestras costas.

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PRINCIPALES ENFERMEDADES TUMORES Y NEOPLASIAS

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Descritos en numerosas especies. Su causa es desconocida, si bien, en algunos casos, se ha postulado un posible origen vírico.

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PRINCIPALES ENFERMEDADES CAUSADAS POR METAZOOS

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CAUSADASPORMETAZOOS

EJEMPLOS:

 Poríferos (Chiona spp.)

  • Cnidarios (Obelia spp.)

  • Turbelarios (Paravortex spp. Urastomia spp.)

  • Digeneos (Bucephalus spp., Gymnophalus spp., Bacciger spp., Himasthla spp.)

  • Cestodos (Tylocephalum spp.)

  • Nemátodos ( Urosporidium spp.)

  • Gasterópodos (Hinia spp.)

  • Poliquetos (Polydora, spp.)

  • Copépodos (Mytilicola spp.)

  • Decápodos (Pinnotheres pisum.)

 

Patologías de especial interés para Andalucía

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Moluscos bivalvos. Almeja fina y japonesa​

Perkinsus olseni

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Andalucia
EXAMENDEV

Ostra plana (Ostrea edulis) y Mejillón (Mytilus galloprovincialis. Marteilia refringens

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Ostión (C. gigas/angulata): Herpesvirus

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Minchinia tapetis

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Teoría:

 

El examen de virus en el diagnóstico de moluscos bivalvos. El diagnóstico de Perkinsus, Marteilia y Bonamia

 

EXAMEN DE VIRUS DE UN MOLUSCO BIVALVO

 

  • Resulta esencial saber reconocer las estructuras anatómicas para poder detectar alteraciones

  • Una cuidadosa observación in vivo de alteraciones en la anatomía de los moluscos bivalvos puede aportar información esencial relativa a su estado de salud

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Bucephallus sp.

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Proctoeces maculatus

Tresenfermedades

Tres enfermedades relevantes para nuestra acuicultura que pueden ser diagnosticadas por procedimiento sencillos:

 

Perkinsosis

La infección por Perkinsus spp. constituye una de las más importantes enfermedades conocidas de moluscos bivalvos. Se trata de un protozoo que provoca una intensa reacción hemocitaria que altera la estructura tisular y afecta a la funcionalidad de órganos tan esenciales como la branquia. Perkinsus olseni(=atlanticus) es, por su distribución y prevalencia, uno de los principales agentes patógenos de las almejas del litoral suratlántico (Ruditapes decussatus, R. philippinarum, Venerupis aurea y Venerupis pullastra)

 

Marteliasis

Marteilia spp. es un protozoo parásito del epitelio del digestivo, en especial de la glándula digestiva. Tiene la peculiaridad de presenta una división endógena. La especie más conocida por las mortalidades causadas en Francia en los 70 es M. refringens que afecta a Ostrea edulis, Mytilus edulis y M. galloprovincialis entre otras especies.

 

Bonamiasis

Bonamia spp. es un protozoo parásito de células sanguíneas, también se puede encontrar libre. Estas célula de pequeño son uninucleadas y se denominan microcélulas. Es responsable de mortalidades de ostra plana en toda Europa desde 1980. Existen diferentes especies de Bonamia y Mikrocytos que afectan a diferentes especies de ostras.

DIAGNOSTICOPERKINSUS

DIAGNÓSTICO DE PERKINSUS

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Incubación de dos hemibranquias en 1 mL medio fluido con tioglicolato (5g/l de extracto de levadura, 15 g/l de caseína digerida con enzimas pancreáticas, 5'5 g/l de cloruro sódico, 0'5 g/l de L-cisteina, 0'5 g/l de tioglicolato sódico, 1 mg/l de resazurina y 0'75 g/l de agar bacteriológico) suplementado con 20 g/l de NaCl y 20 U/ml de penicilina G sódica y 40 µg/ml de sulfato de estreptomicina.

 

Tras la incubación durante 5 días en oscuridad a 20-27°C las branquias son retiradas con asas estériles, extendidas sobre cubreobjetos y teñidas con lugol.

 

En estas condiciones, los trofozoitos de Perkinsus aumentan hasta 10 veces su tamaño, transformándose en prezoosporangios (= hipnosporas) que poseen una pared celular muy gruesa que se tiñe de azul-negro con lugol (Ray, 1952).

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EscalaMackin

DIAGNÓSTICO DE PERKINSUS: Escala de Mackin (grados de infección)

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DIAGNÓSTICO DE MARTEILIA EN MEJILLÓN Y OSTRA PLANA

 

  1. Squash de la glándula digestiva y tinción con V.O.E.

  2. Impronta de glándula digestiva y tinción con V.O.E. o May Grünwald (HEMACOLOR)

 

Tinción del squash con VOE:

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  1. Tomar una porción de glándula digestiva y trocear sobre un porta

  2. Añadir VOE, mezclar bien y aplastar con un cubre

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Tinción de improntas con VOE :

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  1. Fijar 10 x 1s en metanol

  2. 3 min en Colorante V.O.E (Gutiérrez 1997: Disolver 0.2 g Verde Luz SF amarillento, 0.25 g Orange G y 0.3g Eosina en 50 ml H₂Od caliente, añadir 1g de ácido fosfotúngstico, 2 ml de ácido acético glacial y 100 ml de etanol absoluto)

  3. 1 min en tampón fosfato pH 7.2

  4. 10x 1 s en H2Od

  5. Dejar secar o deshidratar en etanol, isoparafina y montar

 

Tinción HEMACOLOR (MERCK): según fabricante

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