Especificación técnica de análisis
Acidez oleica
A.- PRINCIPIO
Disolución de la grasa con una mezcla de alcohol etílico y éter etílico 1:1, neutralización de los ácidos grasos libres con una solución alcohólica de hidróxido potásico.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
La acidez de las grasas y aceites es una expresión convencional del contenido de ácidos grasos libres expresados como ácido oleico. También se denomina grado de acidez.
C.- ALCANCE
Aplicable a grasas y aceites animales y vegetales.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: R.D. 2257/94 nº 9.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: No se especifica
Repetibilidad: No se especifica.
Reproducibilidad: No se especifica.
F.- OBSERVACIONES
La acidez puede expresarse también como Índice de Acidez que se define como los mg de hidróxido potásico necesarios para neutralizar los ácidos grasos libres presentes en la muestra.
Ácido cianhídrico
A.- PRINCIPIO
La muestra se deposita en agua. El ácido cianhídrico se libera bajo la acción de fermentos, se arrastra por destilación en vapor de agua y se recoge en un volumen determinado de solución de nitrato de plata acidificada. El cianuro de plata se separa por filtración y el exceso de nitrato de plata se valora mediante una solución de tiocianato de amonio.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar el contenido en ácido cianhídrico libre y combinado en forma de glucósidos.
C.- ALCANCE
Determinados piensos, y en particular, productos de semillas de lino, de harina de mandioca y de algunas especies de leguminosas.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: RD 2257/1994 nº 22
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos superiores a 5 mg/kg.
Repetibilidad: 10% en valor relativo.
Reproducibilidad: 20% en valor relativo.
F.- OBSERVACIONES
Ácidos grasos
A.- PRINCIPIO
Determinación de la concentración de los ácidos grasos, incluidos el docosahexaenoico (DHA) y el eicosapentaenoico (EPA), mediante la obtención de los ésteres metílicos por metilación directa sobre la muestra.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Concentración en g de los diferentes derivados metilados de ácidos grasos presentes en la muestra, expresados sobre 100 g de ácidos grasos metilados.
C.- ALCANCE
Aplicable a grasas y aceites animales y vegetales.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No Oficial: AOAC 991.39 17ª ed. modificado.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: No se especifica.
Repetibilidad: No se especifica.
Reproducibilidad: La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas con una misma muestra en diferente laboratorio no debe sobrepasar:
0,4% en valor absoluto, para los contenidos inferiores al 5%.
8% en valor relativo, para los contenidos entre el 5% y el 31%.
2,5% en valor absoluto, para los contenidos superiores al 31%.
F.- OBSERVACIONES
Hay diversas modificaciones del método que se refieren al procedimiento de obtención de los ésteres metílicos (normalmente transesterificación con metóxido sódico en metanol) y a la columna cromatográfica (normalmente capilar SP 2330). Puede obtenerse el perfil de ácidos grasos de la grasa de piensos y materias primas por metilación directa de la muestra sin extracción previa de la grasa.
Aerobios recuento total en placa
A.- PRINCIPIO
Siembra en placa Petri con un medio de cultivo apropiado, al que se le añade un extracto de la muestra a diferentes diluciones. Una incubación de la placa durante 48 ± 2 h a 35 ± 1ºC provoca el crecimiento de los microorganismos presentes en la muestra.
El recuento directo de los microorganismos y el cálculo a realizar en función de la cantidad de muestra sembrada permitirá expresar el resultado como recuento total aerobios por gramo.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar la cantidad total de microorganismos aerobios presentes en las materias primas y piensos en el momento del muestreo.
C.- ALCANCE
Materias primas y piensos.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No oficial. Referencias: J. AOAC (1988) 71, 343 y Bacteriological Analytical Manual. Food and Drug Administration (FDA) 8ª Edición (1995).
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: Sin especificar
Reproducibilidad: Sin especificar
F.- OBSERVACIONES
Debe conocerse la incertidumbre de las medidas de los materiales volumétricos y de temperatura. Materiales de Referencia para Aerobios: No se especifica.
Aflatoxinas B1 Método Elisa
A.- PRINCIPIO
La técnica Elisa implica la interacción de antígenos Aflatoxina B1 con los anticuerpos monoclonales de elevada especifidad ligados a la superficie de los micropocillos o de relleno en una microcolumna.
La muestra molida con un tamiz de 0,5 mm se extrae con una mezcla metanolagua 20:80 y se purifica con cloroformo-agua. Sobre la fase orgánica se realiza el test Elisa. La lectura del color desarrollado por el test puede leerse a simple vista o con la ayuda de un espectrofotómetro para obtener resultados cuantitativos. Para muestras con niveles superiores a 50 ppb, el extracto debe diluirse.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Determinación de la aflatoxina B1.
C.- ALCANCE
Piensos y materias primas.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No Oficial: AOAC 993.16
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Concentraciones comprendidas entre 2 y 50 ppb.
Repetibilidad: 20% en valor relativo.
Reproducibilidad: 30 % en valor relativo.
El límite de detección es 1,5 ppb.
F.- OBSERVACIONES
Mediante métodos ELISA pueden determinarse también: Aflatoxinas totales (5 ppb), Ocratoxina (20 ppb), Zearalenona (100 ppb), Toxina T2(100 ppb). Existe un método oficial por cromatografía de líquidos para la determinación de Aflatoxina B1 (RD 2257/1994 nº 15b).
Aerobios recuento total en placa
A.- PRINCIPIO
Siembra en placa Petri con un medio de cultivo apropiado, al que se le añade un extracto de la muestra a diferentes diluciones. Una incubación de la placa durante 48 ± 2 h a 35 ± 1ºC provoca el crecimiento de los microorganismos presentes en la muestra.
El recuento directo de los microorganismos y el cálculo a realizar en función de la cantidad de muestra sembrada permitirá expresar el resultado como recuento total aerobios por gramo.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar la cantidad total de microorganismos aerobios presentes en las materias primas y piensos en el momento del muestreo.
C.- ALCANCE
Materias primas y piensos.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No oficial. Referencias: J. AOAC (1988) 71, 343 y Bacteriological Analytical Manual. Food and Drug Administration (FDA) 8ª Edición (1995).
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: Sin especificar
Reproducibilidad: Sin especificar
F.- OBSERVACIONES
Debe conocerse la incertidumbre de las medidas de los materiales volumétricos y de temperatura. Materiales de Referencia para Aerobios: No se especifica.
Alcaloides (en semillas de altramuz)
A.- PRINCIPIO
Los alcaloides presentes en las semillas de altramuz son solubilizados en una mezcla de éter dietílico y de cloroformo, extrayéndose por ácido clorhídrico. Los alcaloides son precipitados por el ácido sílicico-túngstico, incinerados y pesados.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
La presencia de alcaloides reduce la apetecibilidad del alimento por su sabor amargo.
C.- ALCANCE
Semillas de Altramuz.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No Oficial: R.D. 2257/1994 nº 20. Derogado como método oficial por BOE 02/07/1999.
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: Sin especificar.
Reproducibilidad: Sin especificar.
F.- OBSERVACIONES
Almidón. Método polarimétrico (EWERS)
A.- PRINCIPIO
El método comprende una doble determinación. En la primera, la muestra se trata en caliente mediante ácido clorhídrico diluido. Previa defecación y filtración, se medirá mediante un polarímetro el poder rotatorio de la solución. En la segunda, la muestra se extrae con etanol al 40%. Tras la acidificación del filtrado con ácido clorhídrico, defecación y filtración, se mide el poder rotatorio en las mismas condiciones que en la primera determinación.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar el contenido en almidón y sus productos de degradación de alto peso molecular en los piensos y materias primas. La segunda determinación elimina productos que interfieren en la primera lectura.
C.- ALCANCE
Todas las materias primas excepto productos y derivados de remolacha azucarera, cítricos, lino, colza, copra, girasol, patata, levadura deshidratada, chicharrones e ingredientes ricos en inulina, así como los piensos que contengan estas materias primas en cantidades importantes. Los productos con un contenido en carbonatos superiores al 6% o los ricos en lactosa, precisan de tratamiento previo.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: Orden 16.02.2000
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos superiores al 2,5%.
Repetibilidad:
0,4 ud porcentuales en valor absoluto, para contenidos en almidon inferiores al 40%
1,1% en valor relativo, para contenidos en almidon iguales o superiores al 40%
Reproducibilidad:
1 ud porcentual en valor absoluto, para contenidos en almidon inferiores al 40%
3% en valor relativo, para contenidos en almidon iguales o superiores al 40%
F.- OBSERVACIONES
Existe un método enzimático para la determinación del almidón, obteniéndose valores inferiores que por el método polarimétrico y más variables, especialmente en cereales
Aminas biógenas
A.- PRINCIPIO
Determinación de aminas biógenas por HPLC, mediante extracción con ácido perclórico y derivatización precolumna por cloruro de dansilo. Detección UV a 254 nm.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar el contenido en las principales aminas biógenas que, a partir de cierta concentración en los piensos, pueden provocar desórdenes fisiológicos no deseados.
Los valores obtenidos en materias primas son una expresión de las buenas prácticas de fabricación por parte del proveedor.
C.- ALCANCE
Aplicable a piensos compuestos y materias primas.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No oficial: "Liquid Chromatographic determination of biogenic amines in dry sausages". Journal of AOAC International (1993) Vol. 76, Nº 3, 575-577.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos superiores a 5 mg/kg para aminas biógenas individuales.
Repetibilidad: No se especifica.
Reproducibilidad: No se especifica.
F.- OBSERVACIONES
Arsénico
A.- PRINCIPIO
La muestras se someten a una digestión con ácido nítrico. El arsénico se determina por absorción atómica mediante la generación de hidruros en el momento del análisis.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar la concentración de Arsénico que, a partir de cierta concentración en los piensos, puede provocar desórdenes fisiológicos no deseados. Clasificado en la legislación como producto indeseable en la alimentación animal.
C.- ALCANCE
Aplicable para la determinación del Arsénico en alimentos.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No Oficial: AOAC 986.15 17a Ed.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: No se especifica
Repetibilidad: No se especifica
Reproducibilidad: No se especifica
F.- OBSERVACIONES
Azúcares
A.- PRINCIPIO
Defecación a partir de las soluciones de Carrez 1 y Carrez 2, previa disolución de los azúcares en etanol diluido. Eliminación del etanol y valoración antes y después de la inversión según el método de Luff-Schoorl.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar los azúcares reductores y totales previa
inversión, expresados en glucosa, o en su caso en sacarosa, por conversión con ayuda del factor 0,95.
C.- ALCANCE
Aplicable a piensos compuestos y materias primas. En su caso, procede determinar por separado la lactosa y tenerlo en cuenta al calcular los resultados.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: RD 2257/1994 nº 8
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos superiores al 2,5%
Repetibilidad:
0,3 ud porcentuales en valor absoluto, para los contenidos inferiores al 10%
3% en valor relativo, para los contenidos entre 10 y 20%
0,6 ud porcentuales en valor absoluto, para los contenidos superiores al 20%
Reproducibilidad:
1 ud porcentual en valor absoluto, para los contenidos inferiores al 10%
10% en valor relativo, para los contenidos entre 10 y 20 %
2 ud porcentuales en valor absoluto, para los contenidos superiores al 20%
F.- OBSERVACIONES
Azufre
A.- PRINCIPIO
La muestra se trata con una solución de ácido clorhídrico y el azufre se precipita mediante la adición en exceso de una solución al 10% de cloruro de bario. El peso del precipitado de sulfato de bario obtenido permite calcular la proporción de azufre presente en la muestra.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
El método analítico permite la determinación de azufre total. En la mayor parte de piensos el valor obtenido se asocia al contenido del elemento aportado por las materias primas y el añadido en fabricación.
C.- ALCANCE
Aplicable a la determinación de azufre total.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No Oficial: AOAC 980.02 17ª Ed.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos superiores al 0,10%
Repetibilidad: No se especifica.
Reproducibilidad: No se especifica.
F.- OBSERVACIONES
Método de la AOAC para fertilizantes.
Calcio
A.- PRINCIPIO
La muestra se incinera, se trata con ácido clorhídrico y el calcio se precipita en forma de oxalato. Después de disolver el precipitado en ácido sulfúrico, el ácido oxálico formado se valora con permanganato de potasio.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar el contenido en calcio de los piensos y materias primas.
C.- ALCANCE
Todos los piensos y materias primas. Existen algunas modificaciones del método para productos ricos en magnesio y para fosfatos alumínicos-cálcicos.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: R.D. 2257/1994 nº10.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos superiores al 0,15 %
Repetibilidad:
5 % en valor relativo para los contenidos superiores a 0,50%.
0,05 % en valor absoluto para los contenidos inferiores a 0,50%.
Reproducibilidad:
5 % en valor relativo para los contenidos superiores a 0,50%.
0,05 % en valor absoluto para los contenidos inferiores a 0,50%.
F.- OBSERVACIONES
Existen otros métodos como el de absorción atómica y el colorimétrico. Este último tiene la ventaja de poder automatizar gran parte del análisis.
Caseína total
A.- PRINCIPIO
Se basa en precipitar (después de reconstituida la muestra en agua tibia), la caseína a su punto isoeléctrico. Por lavado se recoge la caseína pura eliminando el suero e impurezas. Se determina vía Kjeldhal su nivel de proteína (N*6,38).
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
El método permite determinar la fracción más importante de proteínas de productos lácteos.
C.- ALCANCE
Materias primas lácteas.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: R.D. 2257/1994 nº20.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Proteína Bruta >=2 %.
Repetibilidad: No se especifica.
Reproducibilidad: No se especifica.
F.- OBSERVACIONES
El método de combustión Dumas tiene interés por su fácil automatización, excelentes resultados, seguridad e higiene en la ejecución y la producción mínima de residuos comparado con el método Kjeldhal u otros métodos que impliquen digestión ácida de la muestra. Junto con las muestras debe analizarse otra de referencia con valor de caseína total conocido.
Cenizas brutas
A.- PRINCIPIO
Incineración de la muestra a 550ºC durante al menos 4 horas y pesada del residuo.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar el contenido en cenizas brutas de los piensos y materias primas.
C.- ALCANCE
Piensos y materias primas.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: RD 2257/1995 nº12.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos superiores al 0,9%
Repetibilidad:
0,3 ud porcentuales en valor absoluto, para contenidos en cenizas inferiores al 20%
Reproducibilidad:
0,5 ud porcentuales en valor absoluto, para contenidos en cenizas inferiores al 20%
F.- OBSERVACIONES
Se recomienda que el horno mufla esté a temperatura ambiente al introducir las muestras.
Cenizas insolubles en ácido clorhídrico
A.- PRINCIPIO
Procedimiento A: Se incinera la muestra, se tratan las cenizas por ebullición en ácido clorhídrico y el residuo insoluble se filtra y se pesa.
Procedimiento B: La mezcla se trata mediante ácido clorhídrico. La solución sefiltra, el residuo se incinera y las cenizas obtenidas se tratan como en el procedimiento A.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar el contenido en materias minerales insolubles en ácido clorhídrico de los piensos y sus materias primas.
C.- ALCANCE
Procedimiento A: Aplicable a las materias primas orgánicas y a la mayor parte de los piensos compuestos.</li> <li>Procedimiento B: Aplicable a mezclas minerales, así como a los piensos compuestos cuyo contenido en insolubles en clorhídrico, determinado según el procedimiento A, sea superior al 1 por 100.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: RD 2257/1994 nº23.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos superiores al 0,5%
Repetibilidad:
0,3 ud porcentuales en valor absoluto, para contenidos en cenizas inferiores al 10%
Reproducibilidad:
0,5 ud porcentuales en valor absoluto, para contenidos en cenizas inferiores al 10%
F.- OBSERVACIONES
Cinc (Método de absorción atómica)
A.- PRINCIPIO
Las cenizas de la muestra se disuelven en medio ácido y se diluyen con agua. La absorbancia de cada elemento a su longitud de onda específica y las calibraciones con soluciones patrón permite determinar la concentración de cada elemento en la muestra.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
El método analítico permite la determinación de Mg, Zn, Fe, Cu y Mn, definidos en la legislación como oligoelementos. En la mayor parte de piensos el valor obtenido se asocia al contenido de estos elementos aportados por las materias primas y el añadido en fabricación.
C.- ALCANCE
Aplicable para la determinación de Mg, Zn, Fe, Cu, Mn en alimentos para animales.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: R.D. 2257/1994.nº 32.
E.- DATOS TÉCNICOS
Contenidos superiores a 20 mg/kg.
Repetibilidad: No se especifica.
Reproducibilidad: La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas con una misma muestra en diferentes laboratorios no debe sobrepasar:
20% en valor relativo.
F.- OBSERVACIONES
Requiere una calibración específica para cada elemento mineral. El método AOAC 999.10 incluye la determinación de Zn, Cu y Fe mediante absorción atómica de llama. El método AOAC 999.11 incluye las mismas determinaciones que el anterior sustituyendo la digestión en microondas por calcinación a 450ºC. Contiene un resumen del estudio interlaboratorio.
Cloruros
A.- PRINCIPIO
El método permite determinar el contenido en cloruros solubles en agua, expresados como porcentaje de NaCl.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
En la mayor parte de piensos y materias primas el valor obtenido se asocia al contenido en cloruros aportados por las materias primas o añadidos en fabricación.
C.- ALCANCE
Aplicable a materias primas y piensos.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: R.D. 2257/1994 nº5.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: NaCl>= 0,2 %.
Repetibilidad: La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efectuadas con una misma muestra no debe sobrepasar:
• 0,05 % en valor absoluto, para los contenidos inferiores al 10%.
Reproducibilidad: La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas con una misma muestra en diferente laboratorio no debe sobrepasar:
• 0,10 % en valor absoluto, para los contenidos inferiores al 10%.
F.- OBSERVACIONES
Correspondencia con ISO 6495 (1999) "Determinación del contenido en cloruros solubles en agua en alimentos para animales".
Cobalto
A.- PRINCIPIO
Las cenizas de la muestra se disuelven en medio ácido y se diluyen con agua. La absorbancia de cobalto a su longitud de onda específica y las calibraciones con soluciones patrón permite determinar la concentración de cobalto en la muestra.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
El método analítico permite la determinación de Cobalto definido en la legislación como oligoelemento. En la mayor parte de piensos el valor obtenido se asocia al contenido de este elemento aportado por las materias primas y el añadido en fabricación.
C.- ALCANCE
Aplicable para la determinación de Co en alimentos.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No oficial.
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: No se especifica.
Reproducibilidad: La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas con una misma muestra en diferentes laboratorios no debe sobrepasar:
• 20% en valor relativo.
F.- OBSERVACIONES
Adaptación del método AOAC 993.14 (17ª Ed) para aguas minerales
Cobre (Método de absorción atómica)
A.- PRINCIPIO
Las cenizas de la muestra se disuelven en medio ácido y se diluyen con agua. La absorbancia de cada elemento a su longitud de onda específica y las calibraciones con soluciones patrón permite determinar la concentración de cada elemento en la muestra.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
El método analítico permite la determinación de Mg, Zn, Fe, Cu y Mn, definidos en la legislación como oligoelementos. En la mayor parte de piensos el valor obtenido se asocia al contenido de estos elementos aportados por las materias primas y el añadido en fabricación.
C.- ALCANCE
Aplicable para la determinación de Mg, Zn, Fe, Cu, Mn en alimentos para animales.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: R.D. 2257/1994.nº 30.
E.- DATOS TÉCNICOS
Contenidos superiores a 10 mg/kg.
Repetibilidad: No se especifica.
Reproducibilidad: La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas con una misma muestra en diferentes laboratorios no debe sobrepasar:
• 20% en valor relativo.
F.- OBSERVACIONES
Requiere una calibración específica para cada elemento mineral. El método AOAC 999.10 incluye la determinación de Zn, Cu y Fe mediante absorción atómica de llama. El método AOAC 999.11 incluye las mismas determinaciones que el anterior sustituyendo la digestión en microondas por calcinación a 450ºC. Contiene un resumen del estudio interlaboratorio.
Test para coliformes
A.- PRINCIPIO
El test esta basado en la capacidad de estas bacterias anaeróbicas de producir gas partiendo de la glucosa (y otros azúcares) y de fermentar la lactosa produciendo ácido y gas cuando se incuban durante 48 ± 2 h a 35ºC.
El resultado se expresará como número más probable (NMP) en función de las diluciones realizadas a la muestra.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar la cantidad total de coliformes presentes en las materias primas y piensos en el momento del muestreo.
C.- ALCANCE
Materias primas y piensos.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No oficial. Referencia: Bacteriological Analytical Manual. Food and Drug Administration (FDA) 8ª Edición (1995).
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: Sin especificar
Reproducibilidad: Sin especificar
F.- OBSERVACIONES
Debe conocerse la incertidumbre de las medidas de los materiales volumétricos y de temperatura. Materiales de Referencia para Coliformes: No se especifica.
Dioxinas
A.- PRINCIPIO
Determinación del perfil de dioxinas, especialmente las 2,3,7,8-sustituidas, mediante técnicas de Cromatografía de gases de alta resolución y detectores de espectrometría de masas (HRGC-HRMS).
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Al igual que los PCB y herbicidas, son compuestos organoclorados y se encuentran en el medio ambiente con frecuencia pero, a diferencia de éstas tienen como origen determinadas actividades industriales o de origen natural.
Su unidad de concentración se expresa como factores de equivalencia de la Organización Mundial de la Salud (WHO) e I-TEQ (International Toxic Equivalent Quantitated) que variarán en función de la toxicidad del perfil de dioxinas encontrado (WHO-TEQ pg/g).
C.- ALCANCE
Materias Primas y Piensos
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No Oficial. US EPA 8290 'Dibenzodioxinas Policlorinadas (PCDD) y Dibenzofuranos Policlorinados (PCDF) por Cromatografía de Gases de Alta Resolución y Espectrometría de Masas de Alta Resolución (HRGC-HRMS).
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: Sin especificar.
Reproducibilidad: Sin especificar.
F.- OBSERVACIONES
Escherichia coli (Recuento en placa)
A.- PRINCIPIO
Siembra en placa Petri con un medio de cultivo apropiado, al que se le añade un extracto de la muestra a diferentes diluciones. Una incubación de la placa durante 48 ± 2 h a 37 ± 1ºC provoca el crecimiento de los microorganismos presentes en la muestra.
El recuento directo de los microorganismos y el cálculo a realizar en función de la cantidad de muestra sembrada permitirá expresar el resultado como colonias por gramo.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar la cantidad total de bacterias que poseen la enzima beta-glucuronidasa (GUD) cuya acción se pone de manifiesto sobre el indicador cromogénico del medio de cultivo al producirse un cambio de pH.
C.- ALCANCE
Materias primas y piensos.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No oficial. Referencias: NF-V08.017 y Bacteriological Analytical Manual. Food and Drug Administration (FDA) 8ª Edición (1995).
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: Sin especificar
Reproducibilidad: Sin especificar
F.- OBSERVACIONES
Debe conocerse la incertidumbre de las medidas de los materiales volumétricos y de temperatura. Materiales de Referencia para E. coli: No se especifica.
Esencia mostaza (isotiocianato de Alilo)
A.- PRINCIPIO
El método permite la determinación de esencia de mostaza expresado como isotiocianato de alilo en semilla y torta de colza.
La esencia de mostaza se libera con fermentos, se arrastra por corriente de vapor en presencia de etanol y se recoge en amoníaco diluido. La solución se trata con de nitrato de plata siguiendo un método de argentimetría clásico.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
La presencia de glucosinolatos, especialmente en semilla y torta de colza, a partir de cierta concentración en los piensos, puede provocar fenómenos de inapetencia o desordenes fisiológicos. Este método valora los glucosinolatos de forma indirecta mediante la determinación los isotiocianatos expresados como isotiocianatos de alilo.
C.- ALCANCE
Semillas y harinas de oleaginosas y piensos que las contienen.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No Oficial: R.D 2257/1994 nº 24, Derogado como método oficial por BOE 05/01/2000
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: Sin especificar.
Reproducibilidad: Sin especificar.
F.- OBSERVACIONES
Estafilococos
A.- PRINCIPIO
Si el nivel esperado es bajo, el método contempla una fase de enriquecimiento en tubo durante 48 h a 35-37ºC. A continuación, siembra en placa en medio de cultivo apropiado e incubación 45-48 h a 35-37ºC.
El resultado se expresará como número más probable (NMP) de S. aureus/g. Las colonias encontradas deben ser confirmadas mediante la prueba de la coagulasa. Existen otras pruebas de confirmación aplicables cuando el test de coagulasa no es definitivo.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar la cantidad total de microorganismos presentes en las materias primas y piensos en el momento del muestreo.
C.- ALCANCE
Materias primas y piensos.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No oficial. Referencia: AOAC (1990) 15ª ed. 980.37- 987.09 y Bacteriological Analytical Manual. Food and Drug Administration (FDA) 8ª Edición (1995).
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: Sin especificar
Reproducibilidad: Sin especificar
F.- OBSERVACIONES
Debe conocerse la incertidumbre de las medidas de los materiales volumétricos y de temperatura. Materiales de Referencia para estafilococos: No se especifica.
Extracto etéreo sin hidrólisis previa. Procedimiento A
A.- PRINCIPIO
Se extrae la grasa por medio de éter de petróleo a 40-60ºC. Se destila el disolvente, se deseca y se pesa.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar el contenido en materias grasas brutas de los piensos y materias primas.
C.- ALCANCE
Aplicable a las materias primas de origen vegetal, excepto las incluidas en el alcance del método con hidrólisis previa (Procedimiento B).
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: RD 609/1999 nº 4
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos en grasa > 0,6%
Repetibilidad:
-
0,2 ud porcentuales en valor absoluto, para contenidos en grasa bruta inferiores al 5%
-
4% en valor relativo sobre el valor más alto, para los contenidos del 5 al 10%
-
0,4 ud porcentuales en valor absoluto, para los contenidos superiores al 10%
-
Reproducibilidad:
-
0,6 ud porcentuales en valor absoluto, para los contenidos en grasa bruta inferiores al 10%
-
1 ud porcentual en valor absoluto, para los contenidos superiores al 10%
F.- OBSERVACIONES
Extracto etéreo con hidrólisis previa. Procedimiento B
A.- PRINCIPIO
Se trata la muestra en caliente mediante ácido clorhídrico. Se enfría y filtra la mezcla. Después de lavar con agua fría y desecar el residuo, éste se somete al mismo análisis que para la grasa sin hidrólisis previa.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar el contenido en materias grasas brutas de los piensos y materias primas cuya grasa no pueda ser extraída por el procedimiento A.
C.- ALCANCE
Aplicable a las materias primas de origen animal y piensos compuestos. Se ha de utilizar para todos los materiales cuyas materias grasas no puedan extraerse completamente sin hidrólisis previa, por ejemplo, los glútenes, las levaduras, las algas, las proteínas de patata y los productos sujetos a procesos como la extrusión, floculación y calentamiento.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: RD 609/1999 nº4
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos en grasa > 0,6%
Repetibilidad:
-
0,2 ud porcentuales en valor absoluto, para los contenidos en grasa bruta inferiores al 5%
-
4% en valor relativo sobre el valor mas alto, para los contenidos del 5 al 10%
-
0,4 ud porcentuales en valor absoluto, para los contenidos superiores al 10%%
Reproducibilidad:
-
0,6 ud porcentuales en valor absoluto, para los contenidos en grasa bruta inferiores al 10%
-
1 ud porcentual en valor absoluto, para los contenidos superiores al 10%.
F.- OBSERVACIONES
En caso de duda o de una materia prima desconocida tratar la muestra con el procedimiento A y reextraer mediante el procedimiento B.
Fibra bruta (Celulosa bruta)
A.- PRINCIPIO
Determinación de las sustancias orgánicas libres de grasa e insolubles en medio ácido y alcalino, convencionalmente llamada fibra bruta. La muestra, en su caso desengrasada, se trata sucesivamente con soluciones en ebullición de ácido sulfúrico e hidróxido potásico, se lava, se deseca, se pesa y se calcina a 500ºC. La pérdida de peso debida a la calcinación corresponde a la fibra bruta de la muestra de ensayo.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar las sustancias orgánicas libres de grasa e insolubles en medio ácido y alcalino.
C.- ALCANCE
Piensos o materias primas con contenidos de grasa superiores al 8% deben desengrasarse previamente. Cuando los piensos y materias primas tienen un contenido en carbonatos superior al 5% deben ser tratados con HCl en frío antes del análisis.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: RD 2257/1994 nº7.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos superiores al 0,9%
Repetibilidad:
-
0,3 ud porcentuales en valor absoluto para contenidos en fibra bruta inferiores al 10%
-
valor relativo sobre el valor mas alto para contenidos en fibra bruta iguales o superiores al 10%.• 3% en v
Reproducibilidad:
-
0,8 ud porcentuales en valor absoluto para contenidos en fibra bruta inferiores al 10%
-
8% en valor relativo sobre el valor mas alto para contenidos en fibra bruta iguales o superiores al 10%.
F.- OBSERVACIONES
Existe un método alternativo para el análisis de fibra en donde se sustituye el crisol de porosidad 2 clásico por unos pequeños sacos porosos. El método se denomina Fibersac y tiene la ventaja de poder realizar 21 muestras simultaneas y obviar la calcinación final en la mayoría de las muestras.
Fluor (Método de electrodo selectivo)
A.- PRINCIPIO
La muestra se disuelve con ácido clorhídrico y se diluye con una solución de electrolito tamponado. En esta solución se sumerge el electrodo y se toman las lecturas en milivoltios. La concentración de flúor se calcula mediante una calibración previa con un patrón.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar la concentración de flúor que, a partir de cierta concentración en los piensos, pueden provocar desórdenes fisiológicos no deseados. Clasificado en la legislación como producto indeseable en la alimentación animal.
C.- ALCANCE
Aplicable para la determinación del flúor en alimentos para animales.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No Oficial: AOAC 975.08 17ª Ed. Bajo esta misma referencia existe un método alternativo por destilación: AOAC 944.08.
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos superiores a 0,2 mg/kg
Repetibilidad: No se especifica
Reproducibilidad: No se especifica
F.- OBSERVACIONES
Requiere una calibración específica para fosfatos.
Fibra neutro detergente, Ácido detergente Y Lignina (FND,FAD,LAD secuenciales)
A.- PRINCIPIO
Determinación de componentes de la pared celular de acuerdo con el método de VAN SOEST.
La muestra, en su caso desengrasada, con un peso inicial P0, se trata sucesivamente con Soluciones Neutro Detergente (EDTA, Sulfito Sódico, Amilasa y otros a pH=7,0 y ebullición durante 1 hora. Secado y Pesado (P1). Obtención de Fibra neutro detergente.
El residuo se trata con: Solución Ácido Detergente (ácido sulfúrico 0,5M y Cetiltrimetil amonio) y ebullición durante 1hora. Secado y Pesado (P2). Obtención de fíbra ácido detergente.
Sobre este residuo, se hace un tratamiento con: Solución Ácido Sulfúrico 72%, 3 horas a temperatura ambiente. Secado, pesado (P3) y calcinado (P4). Obtención de lignina ácido detergente.
Mediante los valores de P0, P1, P2, P3 y P4 se calculan los % de FND, FAD y LAD.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar las sustancias orgánicas asimilables en la mayoría de los casos a:
FND: Hemicelulosa, Celulosa, Lignina, Cutina
FAD: Celulosa, Lignina, Cutina.
LAD: Lignina, Cutina.
C.- ALCANCE
Piensos o materias primas con contenido de grasa superior al 5% deben desengrasarse previamente.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No Oficial: Norma francesa NF V 18-122.
E.- DATOS TÉCNICOS
Fósforo (Método colorimétrico)
A.- PRINCIPIO
Las cenizas de la muestra se disuelven con ácido clorhídrico concentrado y se diluyen con agua. La reacción con una solución molibdovanadato amónico desarrolla color amarillo característico. La concentración de P se calcula mediante una calibración previa con fosfato patrón.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
El método determina la concentración total de fósforo presente en las muestras. En la mayor parte de los piensos será la suma del fósforo aportado por las materias primas y el aportado por las sales de fosfato añadidas en fabricación.
C.- ALCANCE
Aplicable para la determinación de fósforo en alimentos para animales.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: R.D. 2257/1994 nº17
E.- DATOS TÉCNICOS
Dominio de Aplicación: Contenidos superiores a 0,1%
Repetibilidad: No se especifica.
Reproducibilidad: La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas con una misma muestra en diferentes laboratorios no debe sobrepasar:
• 10% en valor relativo, para los contenidos entre el 0,1 y el 5%.
• 0,5% en valor absoluto, para los contenidos superiores al 5%.
F.- OBSERVACIONES
Requiere una calibración específica para fosfatos.
Glucosinolatos
A.- PRINCIPIO
El método permite la determinación de la concentración de glucosinolatos en semillas y harinas de oleaginosas, mediante cromatografía de líquidos HPLC.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
La presencia de glucosinolatos, especialmente en semilla y torta de colza, a partir de cierta concentración en los piensos puede provocar fenómenos de inapetencia o desordenes fisiológicos. Mediante esta determinación podrá comprobarse la clasificación "00" de ciertas variedades de colza.
C.- ALCANCE
Semillas y harinas de oleaginosas.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No Oficial: Método EN ISO 9167-1.
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: Sin especificar.
Reproducibilidad: 25% en valor relativo para los contenidos de glucosinolatos iguales o inferiores a 20 moles/g.
Gosipol
A.- PRINCIPIO
Determinación del gosipol libre y total y las sustancias químicamente parecidas derivadas del gosipol presentes en las semillas y harinas de algodón, así como los piensos que las contengan, mediante un método colorimétrico.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
El gosipol es un compuesto fenólico que a partir de cierta concentración en piensos produce disminución del consumo o desordenes fisiológicos.
C.- ALCANCE
Semillas, harinas de algodón y piensos
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: R.D. 2257/1994 nº 36
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: Sin especificar.
Reproducibilidad: Sin especificar.
Grados Brix
A.- PRINCIPIO
Determinación de la concentración de azúcares en soluciones acuosas, mediante un refractómetro de azúcares.
Este equipo es un instrumento óptico simple calibrado normalmente para soluciones acuosas de azúcar de caña. Permite tomar lecturas rápidas directas sobre la muestra sin ningún tipo de manipulación previa.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Los valores obtenidos se consideran semicuantitativos por la dependencia de las medidas a la temperatura y a la presencia de azúcares diferentes a la sacarosa.
El método es útil para detectar desviaciones importantes de las especificaciones de azúcares de la melaza durante la inspección en recepción.
C.- ALCANCE
Aplicable a melazas.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No oficial
E.- DATOS TÉCNICOS
Grados Brix máximo 90º
Equivalencia: 45,5% azúcares = 75 Grados Brix.
Granos rotos
A.- PRINCIPIO
200 g de muestra son tamizados a través de una malla de aluminio de 0,80 mm de espesor, luz de malla esférica de 4,72 mm de diámetro y una distancia entre centros de 6,34 mm en una misma fila, con un desfase entre las perforaciones de filas adyacentes. Del peso de granos rotos y materias extrañas obtenido dividido por 2 resulta el porcentaje de granos rotos.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
Este método permite determinar el porcentaje de granos rotos y otras materias extrañas que pasan por el tamiz de 4,72 mm y todas las materias extrañas que no pasan por el tamiz.
C.- ALCANCE
Aplicable al maíz
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
No oficial. Ref: Official Grain Standards of the United States.
E.- DATOS TÉCNICOS
Repetibilidad: Sin especificar.
Reproducibilidad: Sin especificar.
Hierro (Método de absorción atómica)
A.- PRINCIPIO
Las cenizas de la muestra se disuelven en medio ácido y se diluyen con agua. La absorbancia de cada elemento a su longitud de onda específica y las calibraciones con soluciones patrón permite determinar la concentración de cada elemento en la muestra.
B.- DEFINICIÓN Y SIGNIFICACIÓN NUTRITIVA
El método analítico permite la determinación de Mg, Zn, Fe, Cu y Mn, definidos en la legislación como oligoelementos. En la mayor parte de piensos el valor obtenido se asocia al contenido de estos elementos aportados por las materias primas y el añadido en fabricación.
C.- ALCANCE
Aplicable para la determinación de Mg, Zn, Fe, Cu, Mn en alimentos para animales.
D.- CATEGORIA DEL MÉTODO
Oficial: R.D. 2257/1994.nº 29.
E.- DATOS TÉCNICOS
Contenidos superiores a 20 mg/kg.
Repetibilidad: No se especifica.
Reproducibilidad: La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas con una misma muestra en diferentes laboratorios no debe sobrepasar:
• 20% en valor relativo.
F.- OBSERVACIONES
Requiere una calibración específica para cada elemento mineral. El método AOAC 999.10 incluye la determinación de Zn, Cu y Fe mediante absorción atómica de llama. El método AOAC 999.11 incluye las mismas determinaciones que el anterior sustituyendo la digestión en microondas por calcinación a 450ºC. Contiene un resumen del estudio interlaboratorio.